鼠疫作為自然疫源性烈性傳染病，具有發病急、傳染快、病死率高等特點[1].為了研究鼠疫菌常用小鼠、豚鼠和家兔等做為實驗動物。鼠疫菌對實質臟器的侵害是鼠疫病理改變的特征[2-3],在接種了不同劑量的鼠疫強、弱毒鼠疫菌的實驗動物，其體內的各個實質性臟器均有不同程度的病理變化，涉及到病原生物安全方面，其病理變化只能肉眼觀察，很少將其病理組織做成病理切片進行鏡下觀察研究。這就需要在確保病原生物安全的前提下，將鼠疫的實驗動物組織徹底消毒滅菌，同時防止組織塊長期固定后固化濃縮，以備制作好鼠疫實驗動物的高質量的病理切片。

1 方 法

1.1 鼠疫實驗動物 從事鼠疫研究的實驗動物主要是小白鼠、豚鼠及家兔等。在做鼠疫實驗時要嚴格規范實驗動物的接種的劑量、接種的部位、接種的步驟等。

1.2 鼠疫實驗動物的取材、消毒及固定 鼠疫實驗動物在處死后迅速取材，生理鹽水沖洗干凈后，固定，以保證原有的形態學結構。消毒固定最好選用中性甲醛溶液，相對 10 %的甲醛能較長的固定組織而不使組織固縮[4],固定標本的窗口以標本不變形為宜[5].

1.3 做鼠疫細菌再生長實驗檢查固定滅菌后的組織塊[4]固定滅菌后將組織取出來用生理鹽水沖洗干凈，再用無菌棉試干組織表面的水分，用無菌的手術刀片切開組織的中央在平皿上壓印做鼠疫細菌再生長實驗及鼠疫噬菌體實驗，看是否還有殘留的鼠疫菌，待檢查徹底無鼠疫菌時才可進行以下其他步驟。

1.4 組織洗滌、脫水、透明和浸蠟 組織在固定后要把滲入里面的甲醛固定液用蒸餾水洗去，否則留在組織中的固定液有的會妨礙染色，有的會產生沉淀或結晶。由于不同實驗動物個體差異性大，故其脫水的時間要求不同。見表 1.

1.5 包埋 將熔化好的石蠟倒入包埋盒，用加溫的鑷子將浸蠟后的組織材料塊切面朝下放入，待蠟液表層凝固即迅速冷卻，完全凝固后即做成含有組織塊的蠟塊。

1.6 切片 包埋好的蠟塊用刀片修整蠟塊后，在切片機上切成一片接著一片的蠟帶，用毛筆輕輕托起放在水浴槽展片。

1.7 展片、撈片和烤片展片：用眼科鑷子鑷起蠟帶輕輕平鋪在 40 ℃~45 ℃的水面上，借水的張力和水的溫度，將略皺的蠟帶自然展平。

撈片：待切片在恒溫水面上充分展平后，將蠟片撈到載玻片的中 1/3 和下 1/3 的中間，傾去載玻片上的余水。

烤片：先在 75 ℃烤片機上干烤 10~30 min 使得蠟片迅速融化，組織粘附于載玻片上，再在 65 ℃的溫箱內烤片 0.5~1 h 左右，脫去溶化組織間隙的石蠟，及載玻片上多余的水分。

1.8 切片脫蠟及水化 干燥后的切片需脫蠟及水化才能在水溶性染液中進行染色。組織脫蠟透明等過程采用物質分子相似相溶原理，試劑有效成分容易減少，所以脫蠟試劑要及時更換[6].

1.9 染色 用常規 HE 染色染病理切圖片標本。

1.10 切片脫水、透明和封片 染色后的切片尚不能在顯微鏡下觀察，需經從低濃度到高濃度的酒精梯度脫水、二甲苯透明。取出切片，擦去多余二甲苯，滴一滴中性樹膠，將蓋玻片復蓋于切片上。

2 小 結

石蠟病理切片制備過程包括取材、固定、洗滌和、包埋、切片與粘片、脫蠟、染色、脫水、透明、封片等步驟，每個步驟都要掌握關鍵技術及操作細節，才能確保切片的質量。

鼠疫實驗動物組織要在規定的時間段處死動物后迅速取材，生理鹽水沖洗后固定，以保證原有的形態學結構。不能等鼠疫菌致死后再取材，一方面染疫后的實驗動物組織在其死后易腐敗變質，另一方面是鼠疫菌繁殖迅速，會累及多個臟器。要準確地按解剖部位病變部位取材，所取組織塊的體積要合乎要求。保證鼠疫菌針對性的病理病變。

鼠疫的實驗動物組織不同于其他組織材料，在固定消毒后，組織必須按嚴格要求規范的做鼠疫細菌再生長實驗及鼠疫噬菌體實驗，觀察看是否還有殘留的鼠疫菌，待檢查徹底無鼠疫菌時才可進行其他步驟。同時由于不同實驗動物的組織差異性，其脫水、透明、浸蠟的時間也不盡相同。

參考文獻：
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[3] 衛生部地方病防治司。鼠疫防治手冊[S].1991,115.
[4] 于守鴻，王麗，席亞芳，等?；瘜W消毒劑對鼠疫實驗動物滅菌效果觀察[J].中國地方病學雜志，2007,26（5）：551-552.
[5] 印敏，徐有坤，李煥萍，等。病理切片制作全程質量控制的實踐[J].中國實用醫藥，2011,6（6）：231-233.
[6] 馬恒輝，周曉軍。HE 染色常見問題對策[J].臨床與實驗病理學雜志，2008,24（4）：478-481.