中 藥 麥 冬 是 百 合 科 （Lihaceea）沿 階 草 屬（Ophiopogon）植物麥冬（Ophiopogonis japonicus）的干燥塊根，始載于《神農本草經》，被列為上品，歷代本草都有記載，亦是歷版《中國藥典》[1]收載的常見藥食同源類藥材。中醫理論認為該藥味甘、微苦，微寒，具有養陰生津、潤肺清心之功效，臨床上常用于肺燥干咳、虛勞咳嗽、津傷口渴、心煩失眠、內熱消渴、腸燥便秘等癥[2].
麥冬含多種化學成分，科研工作者先后從麥冬中分離出多糖、皂苷、黃酮等化合物。這些成分共同作用使麥冬具有廣泛的藥理作用，主要表現為抗心肌缺血和心肌梗塞作用、免疫調節作用、降低血糖作用、抗腫瘤作用等。其中，麥冬多糖因含量較高，提取工藝相對簡單，已成為諸多學者研究的對象?？诜湺嗵蔷哂袦p肥功效[3],是新時代保健品領域潛力巨大的綠色添加物。這也是本研究將麥冬多糖作為提取對象的一個原因。在化妝品應用方面，麥冬多糖有良好的持水性，是一種天然的保濕成分，對皮膚的黏附性強，伸展性高，可用于唇膏、口紅和粉餅膏霜中，經細胞學功效檢測，它還具有抗氧化、延緩衰老等生物活性。但是，從已報道的文獻資料不難看出，麥冬多糖的提取方式多樣，分離純化手段混雜，沒有一個良好的標準化生產工藝。鑒于此，為了滿足麥冬在保健品和化妝品行業的應用，特別是中醫藥“體質養顏”方面的需要，本研究通過正交試驗確立了一種適合于工業化生產及應用的工藝條件，推動傳統中草藥在化妝品和保健品等領域的推廣應用。
1 多糖的提取分離方法
多糖主要采用溶劑提取的方式，多數采用水提醇沉的分離方法，輔以現代技術如微波、超聲波以及超臨界流體等。麥冬多糖屬于植物多糖，又是一類雜多糖，其組成中果糖和葡萄糖的摩爾比約為15∶1[4],極易溶于水，大多難溶于高濃度乙醇，據此，采用水提醇沉的方式可有效提取分離出麥冬多糖。
水提物除雜濃縮后，可過大孔吸附樹脂[5]或者是用DEAE纖維素柱分離制備精制麥冬多糖，也可通過梯級醇沉進行分離純化。
1.1麥冬多糖的提取
通過前期的預試驗摸索，以提取物的固含量為考察指標，我們最終確定了如下提取工藝：取干燥的麥冬塊根300g,先以500mL的95%（體積分數，下同）乙醇進行索氏提取4h,除去脂溶性雜質以及皂苷和黃酮等（醇提物可用于后期的黃酮和皂苷提?。?，揮去乙醇后，烘干，然后水提。水提條件為：按料液體積比1∶6提取3次，每次90min,保持微沸。
水提液抽濾除雜后，濃縮至450~500mL,此時黏度剛好為5mPa·s左右，符合醇沉需要，加入95%乙醇使醇體積分數為65%,靜置過夜，除去下層絮狀沉淀后，往上清液內繼續添加95%乙醇至醇體積分數達80%,靜置過夜，收集下層亮黃色黏稠沉淀，上清液繼續加乙醇至醇體積分數為85%,靜置過夜，合并收集沉淀，沉淀于50℃烘箱內烘干并不斷攪動至恒重，粉碎，過80目（孔徑約0.2mm）篩，得乳白色粗多糖粉末71.84g,計算得率為23.61%,純度為93.8%.此粉末常溫密閉放置六個月，未出現任何吸潮、結塊、變色情況，可長期保存，便于企業貯存和使用。
1.2正交試驗確定提取工藝
以料液體積比、提取溫度、提取次數、提取時間為研究因素，以提取物固含量為考察指標，設計一正交試驗L9（34），確定最佳提取工藝。取醇提后烘干的麥冬塊根9份，每份20g,依次試驗，所得液體過濾除雜后濃縮至50mL,然后檢測固含量，因素水平設計見表1,正交試驗結果見表2.根據正交試驗結果并結合提取經驗，我們最后確定最佳提取工藝為料液體積比1∶6,提取3次，每次90min,提取溫度為100℃.此工藝下得到的提取率高于最優組合D3A2B1C3.
1.3濃縮比例的確定
水提液進行醇沉前必須濃縮至一定比例，如果濃縮得不夠也即是溶液過稀，直接加95%乙醇后，既浪費原料，而且達不到預期的醇沉效果；如果濃縮得太過了，即溶液太黏稠，再加95%乙醇會導致過多的雜質粘附在糖類上一起沉淀出來，不能進行有效的除雜、分離操作。所以，進行適當比例的濃縮是醇沉的關鍵！
本文借鑒日化產品生產工藝中采用的“黏度”工藝標準，對麥冬多糖水提液的濃縮進行量化，對比其他文獻采用的“相對密度”標準[6],此方法同樣簡單可行，而且能進一步開拓思路。
按上述提取工藝，取醇提后的水提液，濃縮成稠膏（含水量極低），然后各取10g分別盛放于5個100mL的燒杯內，編號①、②、③、④、⑤,依次加水稀釋，稀釋比例1∶0.6、1∶0.8、1∶1、1∶1.2、1∶1.4（均為體積比，下同），然后加入95%乙醇，使5份溶液中醇體積分數均達到65%,靜置過夜，觀察醇沉效果。
①和②下層都是黏稠狀沉淀，晃動后無絮狀物漂??；③④⑤可見明顯絮狀沉淀，分散度依次升高，絮狀物的量依次減少。由此，我們確定了③和④為65%醇沉時的范圍。再取稠膏，按照1∶1和1∶1.4的比例進行稀釋，然后測其黏度和相對密度，確立了醇沉時的黏度范圍為4.6~5.1mPa·s,計算出相對密度約為1.15.此相對密度與文獻[7]所記載的“濃縮至相對密度為1.25”相近，但是醇沉分離效果卻有很大的提高。因為后者的醇沉沉淀中含有大量有用的多糖，也就是前面所提到的濃縮過度所致的不良后果。
按此條件進行65%醇沉的重復性試驗，再現性良好。通過多次試驗證實，可取300g醇提后的麥冬塊根進行工藝水提，濃縮至水溶液為450mL,此時檢測黏度恰好為5mPa·s,即可進行65%醇沉除雜。
1.4大孔樹脂分離純化
AB-8大孔吸附樹脂用95%乙醇浸泡24h,裝柱，確保無氣泡，水洗至水洗液與水1∶2混合不變白為止。將85%醇沉多糖加水溶解，上柱，分別以純水、30%乙醇、50%乙醇和95%乙醇洗脫，收集水洗脫液，濃縮后進行85%醇沉，收集下層多糖，烘干，粉碎。對比未過柱所得多糖，二者外觀無明顯區別。同時進行蛋白質含量測定，看是否有過柱的必要。試驗表明，過柱除蛋白雖然可行，但是不適于工業化應用。
2 相關檢測
2.1純度測定
利用高效液相色譜法測定多糖的純度，所用儀器及檢測條件如下：P1202高壓恒流泵，大連依利特分析儀器有限公司；RI-101示差折光檢測器，日本Shodex公司；pH計，瑞士Mettler-Toledo公司；AE100分 析 天 平，瑞 士Mettler-Toledo公 司；TSK-GEL G2000SW（7.5mm×300mm），日本東曹株式會社；磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉，天津科密歐化學試劑開發中心。
色譜條件：流動相為pH 6.0的磷酸緩沖液；流速0.5mL/min;檢測器溫度30℃;柱溫為室溫；柱壓0.9MPa.三個樣 品，分 別為80%醇 沉 所 得 多 糖 粉 末，85%醇沉所得多糖粉末以及過柱所得多糖粉末，分別編號為②、③、④.然后稱量②號樣品0.021 1g、③號樣品0.020 7g、④號樣品0.020 8g,分別于10mL容量瓶中加純水定容。多糖純度（峰面積百分比）見表3,高效液相色譜圖見圖1.從圖1中明顯可以看出，提取分離的多糖主要有3種，其中出峰最早的多糖相對含量最高，可達90%左右，其余2種只占較小比例。
從表3中樣品②和③的數據可以看出，高濃度醇沉能進一步純化多糖。但是考慮到95%乙醇的使用量，我們建議不繼續進行高濃度的醇沉。
對比后文的蛋白質含量，從譜圖中可以發現糖蛋白的存在。因其普遍存在于生物細胞中，不易被分離除去，但其含量不高，并不影響應用。接下來的工作可以嘗試將糖蛋白分離去除，進一步純化。
2.2 蛋白去除率測定
通過凱氏定氮試驗[7],測定經65%醇沉的多糖與未經65%醇沉的多糖之間蛋白質含量的區別，前者蛋白質含量為2.45（g/100g），后者為4.85（g/100g），并計算出蛋白去除率為50.52%.同時將經65%醇沉除雜所得多糖水溶，進行Sevage法除蛋白試驗，看不到明顯的蛋白質層，表明蛋白含量很低。
具體結果見表4.對比二者差異，65%醇沉可明顯去除蛋白質，而且可不使用有機試劑，大大提高了生產效率，保證無有機殘留，為綠色化學在化妝品中的應用 提 供 了 一 定 的 啟 示。事 實 充 分 證 明 了65%醇沉除雜的必要性。
2.3麥冬提取液防腐挑戰試驗
按照國家標準GB 4789[8]的要求，接種菌種：銅綠假單胞菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉和實驗室收集的雜菌，然后進行相應的檢測。樣品共2份，分別是提取的麥冬多糖稠膏和濃縮至無醇味后添加防腐劑（質量分數0.1%尼泊金乙酯鈉和5%丙二醇）的液體，編號分別為1和2.
檢驗這兩個樣品的菌落總數及霉菌和酵母菌。當2號樣品檢驗合格后進行防腐挑戰試驗，接種1mL菌液。結果見表5.
表5的檢測結果表明：以此工藝條件生產的麥冬多糖，菌含量符合《化妝品衛生規范》對化妝品原料的要求，可以放心地添加于化妝品和保健品中。
防腐挑戰試驗的通過也進一步證實了麥冬多糖濃縮糖漿可以長期存放不變質，滿足了化妝品原料的儲存和應用需要。因為樣品1中大部分都是糖，水分含量低，糖分含量高，而糖的作用跟鹽的作用類似，可形成很高的滲透壓，一般微生物無法生長，不易變質，故菌含量可符合要求。而樣品2中添加了防腐劑，起到了明顯的防腐效果，此防腐條件可以作為麥冬多糖水液的應用參考。
3 護膚霜配制以及考察
3.1護膚霜的制備
生產工藝如下：按照配方準確稱量A、B組分，分別加熱至80℃,保溫10min,然后在不斷攪拌的條件下將A組分加入到B組分中，繼續保溫并充分攪拌1min,均質1.5min,然后不斷攪拌，降溫至50℃后，加入C組分，降溫至40℃時加入D組分。
3.2試驗考察
3.2.1理化性質及穩定性按此配方工藝制備的麥冬護膚霜外觀自然，呈現細膩的乳白色膏體，有天鵝絨般的質感。根據行業標 準QB/T 1857-2004進 行 理 化 檢 驗：pH為6.65;在-20℃下耐寒3個月，恢復至常溫后，膏體無泛粗、分層等異樣；在45℃下耐熱3個月，恢復至常溫后，膏體無分層。由此可見，此配方穩定性符合行業要求，可以進行工業化生產。
3.2.2安全性考察此配方原料均符合《化妝品衛生規范》要求，其生產工藝綠色環保，只用到了食品級乙醇作為分離試劑，充分保證了原料的安全性。人群直接涂抹試用此護膚霜，質感細膩，無任何刺激感。選30人進行人體斑貼試驗，均無紅斑或丘疹出現。
3.2.3功效性考察針對人群試用，采用皮膚測試儀進行保濕性測試，效果顯著，不同受試者皮膚均顯示有一定程度的改善效果。而且麥冬具有延緩衰老的功效[10],長期使用可明顯改善體質。
4 結論
（1）多糖提取分離方式多樣，沒有一個簡單有效的生產化標準。如劉霞[9]等取麥冬水提液過大孔吸附樹脂，用水和70%乙醇洗脫同步提取湖北麥冬總多糖和總皂苷，分離效果很好，但是不適合工業化生產應用。本研究通過一系列試驗驗證，確立了一個麥冬多糖的工業化生產工藝標準，工藝條件為：麥冬塊根先以95%乙醇回流提取4h,烘干后煎煮，料液體積比1∶6,提取3次，每次90min,合并提取液，抽濾除雜后濃縮至黏度為4.6~5.1mPa·s,先以65%醇沉，再以85%醇沉，收集沉淀，烘干粉碎。粉末便于貯存和銷售運輸，多糖溶液可現用現制。但是鑒于制粉工藝太過復雜，工業化生產可將65%醇沉除雜后的上清液濃縮為3∶1的料液，此時黏度為200mPa·s,pH為4.94,可長期存放不變質。亦可在醇沉除雜后揮去乙醇的溶液中加入適當的防腐劑，制備成相應的溶液，然后進行工業化生產應用。
（2）全過程只用到了食品級乙醇作為有機試劑，工業純水作為提取劑，而且乙醇在后期很容易去除，工藝簡單、易操作。此條件生產的原料符合《化妝品衛生規范》[11]和《保?。üδ埽┦称吠ㄓ脴藴省穂12]要求，可添加到化妝品和保健品中作為功效性物質。麥冬多糖粉末添加于保健品中有養陰生津、潤肺清心的功效，此外還有減肥作用。
（3）麥冬多糖提取，只要用塊根即可，無需粉碎。粉碎不僅耗費大量的物力、財力，而且提取率僅提高1.36%,且后期的抽濾除雜極為耗時，故無需粉碎。
（4）此配方生產的麥冬護膚霜實現了全新升級，采用最新的乳化劑，質感細膩、舒爽，采用“中醫養顏”理論添加了特有的麥冬提取物，符合現代人的需求。下一步我們會對其具體的功效性進行一系列探討研究，完善產品各方面的數據。
參考文獻
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