蛔蟲病是人體最常見的腸道寄生蟲病之一，也是我國一項較嚴重的公共衛生問題，嚴重危害人民群眾的身體健康，阻礙經濟發展和社會進步。被蛔蟲卵污染的土壤是人類感染的主要來源，為了解我國農村土壤中蛔蟲卵污染情況，衛生部于 2011 年下發了《2011年全國農村環境衛生監測項目技術方案》
，要求對土壤中蛔蟲卵進行檢測。錦州市選取凌海市為監測點，從 2011 年開始，每年隨機選擇 20 個行政村進行采樣，3 年共采集了 60 份樣品。為配合監測工作的開展，科學有效的檢測出蛔蟲卵，本文通過對 60 份樣品的檢測結果進行分析，來探討影響檢測結果的相關因素。
1 材料與方法
1． 1 儀器
CX31 型顯微鏡\\( 日本奧林巴斯有限公司\\) ，ALLegra X －12 型離心機\\( 美國貝克曼庫爾特商貿有限公司\\) ，XH － C 型漩渦混勻器\\( 常州潤華電器有限公司\\) 。
1． 2 試劑
5% 氫氧化鈉溶液\\( 批號: 20120815，生產廠家: 天津市光復科技發展有限公司\\) ，飽和硝酸鈉溶液\\( 批號: 20120504，生產廠家: 天津市光復科技發展有限公司\\) 。
1． 3 檢測方法
1． 3． 1 檢測標準 采用飽和硝酸鹽漂浮法進行檢測，參考《糞便無害化衛生標準》\\( GB7959 －1987\\)，《土源性線蟲病防治技術方案》\\( 2010 年版\\)。
1． 3． 2 檢測步驟 剔除菜葉、樹皮等大雜物，壓碎土樣中的大顆粒; 然后用孔徑 3 mm 的銅篩和孔徑為2 mm的銅篩過篩，收集過篩后的土樣。取 50 ml 大離心管，放入過篩后的土樣 10 g，加5%氫氧化鈉溶液至40 ml 或 45 ml 刻度線。放入 10 顆鋼珠，用橡皮塞緊塞管口，在振蕩器上振蕩 15 min，可反復 3 次 ～4 次，待充分混合后，以 2000 r/min，離心 4 min。棄去上部的氫氧化鈉，加入飽和硝酸鈉溶液充分攪拌混勻，2000 r / min 離心 4 min，再加飽和硝酸鈉溶液滿至管口，覆上 18 mm ×18 mm 蓋玻片。靜置 15 min 后，將蓋玻片迅速翻轉取下，置于載玻片上鏡檢，同時再覆上第 2 張蓋玻片，如此反復，共計數 3 張蓋玻片。
1． 4 質量控制
1． 4． 1 采樣方法 統一 采用 1 m2范圍內 5 點取樣法，采集表層土壤，深度均在 5 cm ～20 cm 之間，采樣量 ＞50 g.
1． 4． 2 清洗銅篩 每次將篩過土壤的銅篩進行清洗，晾干后篩下 1 份樣品。
1． 5 統計分析
采用 SPSS 15． 0 統計軟件進行數據分析。
2 結 果
2． 1 采樣季節對檢測結果的影響
2011 年 － 2013年錦州市共采集監測點土壤樣品 60 份，每年采集 20份。2011 年 8 月份、2012 年 8 月份采樣，2013 年 11月份采樣。3 年間蛔蟲卵的總體檢出率為 58． 3%，2012 年檢出率最高為 70% ，3 年間檢出率差異無統計學意義\\( χ2= 1． 782，P ＞ 0． 05\\) 。2012 年檢出活卵數量最高，200 g 樣品檢出活卵數為 21 個，2013 年最低為 9 個，3 年間蛔蟲卵存活率差異有統計學意義\\( χ2=8． 182，P ＜ 0． 05\\) \\( 表 1\\) ?！颈?】
將 8 月份采集的 40 份樣品與 11 月份采集的 20份樣品檢測結果進行比較，11 月份采集樣品的檢出率和存活率均低于 8 月份，存活率下降比例較大。在采樣方法統一的前提下，隨著土壤溫度的降低，蛔蟲卵的檢出率和存活率均有所下降\\( 表 2\\) ?！颈?】
2． 2 振蕩工具的使用對檢測結果的影響
挑選出檢出蛔蟲卵的 5 份平行樣品進行振蕩效果比較，振蕩時間均為 15 min。從 5 份平行樣品的檢測結果中可以看出，手動振蕩的檢出數量均多于振蕩器振蕩。由此可見在本實驗室的實驗條件下，手動振蕩的效果要好于振蕩器的振蕩效果\\( 表 3\\) ?！颈?】
2． 3 操作手法對檢測結果的影響
玻片吸附前要求飽和硝酸鈉溶液量要恰當，應達到滿而不溢出; 覆上玻片后如果出現氣泡，此時若馬上換另一張玻片再吸，會降低檢出率; 如果再補充液體試圖將氣泡趕走，成功率也會很低，多數情況下氣泡未被趕走，而液體溢出，降低檢出率。離心管蓋的內壁由于震蕩時液體會有一定的吸附，因此蓋的內壁也需用硝酸鈉溶液進行沖洗，否則會降低檢出率。
2． 4 鏡檢對檢測結果的影響
鏡下計數時要求檢測人員掌握活卵和死卵之間的形態區別，應將含有幼蟲的計為活卵，其他階段的或單細胞的計為死卵。
3 討 論
通過錦州市 3 年間采集的 60 份土壤樣品中蛔蟲卵的檢測結果可以看出，在統一采樣方法和檢測方法并確保質量控制的前提下，采樣季節對蛔蟲卵檢測有一定影響。隨著土壤溫度的降低，土壤中的蛔蟲卵大部分已經死掉，要想獲得較高的蛔蟲卵存活率應在7 月 － 8 月份進行監測采樣，這同《遼寧省農村環境衛生監測項目技術方案》要求是一致的。振蕩器的使用應根據實驗室情況而定，檢測前可將振蕩器的振蕩效果進行比較，從而選擇理想的振蕩工具，建議本實驗室更換振蕩效果好的振蕩器。另外操作手法、土壤性質、離心的時間與次數等對檢出率均有影響。
實驗人員只有熟悉掌握檢測原理和各種影響因素，進而采用科學的檢測方法，才能獲得理想的檢測效果進而提高土壤中蛔蟲卵的檢出率。
參考文獻
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